实验动物繁育及遗传质量控制
实验动物作为科学研究与产品质量检验必不可少的条件资源,对生命科学和医药产业科技创新活动发挥着重要推动和支撑作用。实验动物是遗传得以控制的特殊动物群体,其遗传质量的高低直接关乎实验结果的可靠性和准确性。经常性地开展遗传检测分析,不但可对动物选种、育种和品种资源的保存、开发和利用具有指导意义,而且可确保近交系动物个体间的均质性及封闭群体动物的杂合性和基因库的完整性。遗传质量监测是实验动物质量控制的重要内容之一,是发现实验动物遗传变异、保障动物质量符合要求的重要手段。实验动物的遗传质量监测是通过科学的方法对近交系动物进行遗传本底的一致性检验和封闭群动物的群体遗传学分析,评价其是否符合品系或群体特征,确保品种、品系动物固有的遗传组成和生物学特性。
为保障斯贝福公司生产和销售的实验动物大鼠和小鼠的遗传质量,参照中国《GB14923-2010 实验动物 哺乳类实验动物的遗传质量控制》标准,结合国内外文献和自主研发建立快速、无损伤、高通量、准确的基于SNP技术的斯贝福大小鼠遗传质量评价技术方法,在此基础上,建立5项斯贝福大、小鼠繁育与遗传质量控制企业标准:《Q/BZ 2021-0001 近交系小鼠 繁育与遗传质量控制》;《Q/BZ 2021-0002 封闭群ICR小鼠 繁育与遗传质量控制》;《Q/BZ 2022-0001 封闭群KM小鼠 繁育与遗传质量控制》;《Q/BZ 2022-0002 近交系大鼠 繁育与遗传质量控制》和《Q/BZ 2022-0003 封闭群大鼠 繁育与遗传质量控制》。
实验动物繁育
企业标准《Q/BZ 2021-0001 近交系小鼠 繁育与遗传质量控制》和《Q/BZ 2022-0002 近交系大鼠 繁育与遗传质量控制》中明确规定,近交系动物的繁殖分为基础群(foundation stock)、血缘扩大群(pedigree expansion stock)和生产群(production stock),其繁育方式严格按照《GB14923-2010 实验动物 哺乳类实验动物的遗传质量控制》标准进行,使用“红绿灯”繁育体系。
封闭群企业标准规定,为保持封闭群的遗传基因的稳定,封闭群应足够大,并尽量避免近交交配。根据封闭群的大小,选用最佳避免近交法、随机交配法或循环交配法方法进行繁殖。
实验动物遗传检测
按照企业标准规定,每年定期对公司内各生产单位繁育的品系进行SNP检测,同时新引种动物繁育前即进行遗传检测,判定动物繁育和引种动物的遗传质量。按照各企业标准要求,引种的每个个体、群体中抽样样本剪鼠尾,通过DNA提取、PCR扩增、Sanger测序和群体遗传学分析。
Sanger测序结果分析
位点 |
染色体位置 |
等位基因数 |
有效等位基因数 |
香隆指数 |
观测杂合度 |
期望杂合度 |
平均杂合度 |
Hardy-Weinberg遗传平衡P值 |
T-1 |
1 |
2 |
1.6653 |
0.589 |
0.4828 |
0.4065 |
0.3995 |
P>0.05 |
T-2 |
13 |
2 |
1.312 |
0.4012 |
0.2759 |
0.242 |
0.2378 |
P>0.05 |
T-3 |
2 |
2 |
1.8672 |
0.6572 |
0.6667 |
0.4723 |
0.4644 |
P>0.05 |
T-4 |
8 |
2 |
1.957 |
0.6821 |
0.4815 |
0.4983 |
0.489 |
P>0.05 |
T-5 |
11 |
2 |
1.763 |
0.6243 |
0.3667 |
0.4401 |
0.4328 |
P>0.05 |
T-6 |
13 |
2 |
1.9802 |
0.6881 |
0.3 |
0.5034 |
0.495 |
P>0.05 |
T-7 |
16 |
2 |
1.763 |
0.6243 |
0.4333 |
0.4401 |
0.4328 |
P>0.05 |
T-8 |
19 |
2 |
1.4438 |
0.4857 |
0.3103 |
0.3128 |
0.3074 |
P>0.05 |
平均 |
|
|
1.5074 |
0.4515 |
0.4146 |
0.4144 |
0.4073 |
|
2021年KM小鼠群体遗传学分析结果